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Título: Potencial antagonista de bradyrhizobium spp. sobre patógenos de solo da cultura da soja
Título(s) alternativo(s): Potential antagonist of Bradyrhizobiumspp. in the biological control of soybean diseases
Autor(es): Russiano, Maira Cristina Schuster
Orientador(es): Mazaro, Sérgio Miguel
Palavras-chave: Fitopatologia
Genética vegetal
Metabólitos
Ecologia
Plant diseases
Plant genetics
Metabolites
Ecology
Data do documento: 18-Fev-2020
Editor: Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Câmpus: Pato Branco
Citação: RUSSIANO, Maira Cristina Schuster. Potencial antagonista de bradyrhizobium spp. sobre patógenos de solo da cultura da soja. 2020. Dissertação (Mestrado em Agronomia) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Pato Branco, 2020.
Resumo: Bradyrhizobiumspp.se caracteriza como um inoculante utilizado na fixação biológica de nitrogênio em soja, porém seu potencial no controle de fitopatógenos ainda é pouco explorado. Deste modo, o presente trabalho objetiva avaliar o potencial antagonista de quatro estirpes/estirpes de Bradyrhizobiumspp.disponíveis no Brasil, sendo elas SEMIA 587, SEMIA 5019, SEMIA 5079 e SEMIA 5080 no controle biológico de Fusarium crassistipitatum, Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum.Em experimento in vitro foi avaliado o antagonismo exercido por Bradyrhizobium spp.por meio de confronto direto envolvendo dois métodos, sendo eles ométodo de confronto do agente de controle biológico versus o fitopatógeno em meio de cultura, que consiste em placas de Petricom meio YM,onde as estirpesde Bradyrhizobium spp. foram colocadas em um círculo de 4 cm de diâmetro, e no centro deste círculo foitransferido um disco de micéliode 7mm de diâmetro do fungo fitopatogênico; e pelo método da microbiolização de sementes de soja com as estirpes de Bradyrhizobium spp., onde as sementes microbiolizadas forampostas a 1cm de distância da borda da placa de Petricommeio BDA, e do lado oposto foi transferido um disco de micélio de 7mm de diâmetro do fitopatógeno à 1cm de distância da borda oposta.As amostras de cada tratamento do método do confronto em meio de culturaforam submetidas à microscopia eletrônica de varredura com ampliação de 500 vezes, a fim de observar as modificações morfológicas das hifas fúngicas quando em contato direto com as estirpes estudadas. Também foram realizados ensaios para verificar o potencial de antifúngico dos filtrados doscultivos (metabólitos) das estirpes de Bradyrhizobium spp.,isento de células, o qual foi incorporado em meio BDA fundente na concentração de 10%e transferidoem placas de Petri, no centro da placa foi disposto um disco de micélio de 7mm de diâmetro do patógeno conforme tratamentos.Ainda avaliou-se a ação antifúngica dos metabólitos pelametodologia da Concentração Inibitória Mínima, através da microdiluição seriada de metabólitos das estirpes de Bradyrhizobium spp. Para ambos os métodos de confronto direto e para a avaliação antifúngica, asplacasforam mantidas em BOD a25°C com foto período de 12 horas, diariamente, quantificou-se o crescimento micelial dos fitopatógenos, até que o tratamento testemunha contendo apenas o fitopatógeno atingisseo crescimento completo na borda da placa de Petri.O delineamento experimental adotado em todos os experimentos,foi o inteiramente casualizado com quatro repetições. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de normalidade de Lilliefors; e por se trataremde experimentos qualitativo x quantitativo, realizou-se a ANOVA seguido da análise de regressão no software Genes.Pode-se observar noconfronto direto tanto pelométodo das estirpes de Bradyrhizobiumversus fitopatógenos, quanto pela microbiolização das sementes de soja, que as estirpes SEMIA 5080 e SEMIA 5019 foram as que obtiveram melhor controle dos quatro fitopatógenos estudados, seguido pelo bom desempenho da estirpe SEMIA 5079, sendo que a estirpe SEMIA 587 não demonstrou controle algum sobre os fitopatógenos. Os metabólitos das estirpes de Bradyrhizobium spp. na concentração de 10%, não apresentaram ação antifúngica sobre os fitopatógenos estudados.
Abstract: Bradyrhizobiumspp., it is characterized as a good inoculant for biological nitrogen fixation in soybean, but its potential in the control of phytopathogens is still little known. Thus, the present work aims to evaluate the potential antagonist of four strains Bradyrhizobium spp. SEMIA 587, SEMIA 5019, SEMIA 5079 and SEMIA 5080 in the biological control of Fusarium crassistipitatum, Macrophomina phaseolina, Rhizoctonia solani,and Sclerotinia sclerotiorum.The in vitro experiment was evaluated or antagonized by Bradyrhizobium spp. through direct confrontation involving two methods, the method of confrontation with the biological control agent versus the adjustment in the culture medium, which consists of Petriplates with YM medium, where the strains of Bradyrhizobium spp. they were placed in a 4 cm diameter circle, and no center of this circle was transferred to a 7 mm diameter mycelium disk of the phytopathogenic fungus; and by the soybean seed microbiolization method with strains of Bradyrhizobium spp., where microbiolized seeds were placed 1 cm away from the edge of the Petriplate with BDA medium, and on the opposite side was transferred to a 7mm mycelium disk adjustment diameter 1 cm away from the opposite edge. As the samples of each treatment of the confrontation method in the culture medium were subjected to scanning electron microscopy with 500 times magnification, an end of observation as morphological changes of the fungal hyphae when in direct contact with the studied cephae. Assays were also performed to verify the antibiosis of Bradyrhizobiumspp. Strains using the cell-free agent filtrate, which was incorporated into 10% concentration BDA flux media and transferred to Petriplates in the center of the plate, a 7mm diameter mycelium disc of the pathogen was arranged according to treatments. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) methodology was used for the verification of antibiosis through serial microdilution of Bradyrhizobium spp. free fromliving cells. For both confrontation methods and plaque antibiosis evaluation, mycelial growth evaluations were performed daily with the aid of a graduated ruler every 24 hours until the control containing only the phytopathogen reached full growth at theedge of the plate. Petriplate. The experimental design adopted in all experiments was completely randomized with four replications. The obtained data were submitted to the Lilliefors normality test; and because these were qualitative x quantitative experiments, ANOVA was performed followed by regression analysis in the Genes software. It can be observed in the confrontation by both the adapted method ofthe circle and the microbiolization of soybean seeds that the SEMIA 5080 and SEMIA 5019 strains obtained the best control of the four studied phytopathogens, followed by the good performance of the SEMIA 5079 strain. The SEMIA 587 strain showed no controlover phytopathogens. The strains of Bradyrhizobium spp. showed no antibiosis on phytopathogens at 10% concentration, as well as on MIC.
URI: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/4774
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