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Título: Respostas moleculares do feijão ao crestamento bacteriano comum
Título(s) alternativo(s): Common beanmolecular responses to common bacterial blight
Autor(es): Fedrigo, Katiane
Orientador(es): Finatto, Taciane
Palavras-chave: Feijão-comum
Bactérias fitopatogênicas
Expressão gênica
Common bean
Phytopathogenic bacteria
Gene expression
Data do documento: 5-Jul-2019
Editor: Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Câmpus: Pato Branco
Citação: FEDRIGO, Katiane. Respostas moleculares do feijão ao crestamento bacteriano comum. 2019. Tese (Doutorado em Agronomia) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Pato Branco, 2019.
Resumo: O feijão comum (Phaseolus vulgarisL.) é uma das leguminosas mais produzidas e consumidas no mundo. Entretanto, numerosas doenças afetam o cultivo desta cultura, dentre elas o crestamento bacterianocomum causada pela bactéria Xanthomonas axonopodispv. phaseoli. Sob condições de estresse, as plantas ativam cascatas de sinalização que aumentam ou suprimem a expressão dos genes-alvo, alterando as respostas fisiológicas das plantas. Este trabalho teve como objetivo analisar as respostas moleculares do feijão ao crestamento bacteriano comum. O experimento foi conduzido em delineamento de blocos ao acaso com 2 cultivares (IPR Colibri -Suscetívele IAC Milênio -Moderadamente Resistente) x 7 métodos (sementes inoculadas por imersão, sementes inoculadas por infiltração a vácuo, folhas inoculadas, folhas apenas feridas, caule inoculado, caule apenas feridoe plantas não inoculadas (controle)) com 4 repetições. As folhas das plantas foram coletadas para análise de metilação do DNA e expressão de genes de defesa por PCR semiquantitativa. A severidade da doença foi avaliada aos 7, 14, 21 e 28 dias após a semeadura. Aos 28 dias após a semeadura, as plantas foram coletadas para análise da massa fresca e seca de folhas e caules. Outro estudo in silicoda regulação dos promotores de genes que atua na sinalização ao ataque de patógenos foi realizado. Os resultados encontrados no assunto1 indicam que o método de infiltração a vácuo foi o mais eficiente para avaliar a gravidade da doença em ambas as cultivares de feijão. Além disso, os valores de biomassa da parte aérea foram relacionados à severidade, ou seja, em plantas com maior severidade a massa da parte aérea foi menor. No assunto2, foi observado que a cultivar IAC Milênio apresentou maior aumento na expressão gênica em relação à cultivarI PR Colibri, para os genes analisados, principalmente para o gene Phvul.002G092300. Além disso, a metilação do promotor pode influenciar a expressão dos genes Phvul.002G092300, Phvul.003G159700, Phvul.004G015000e Phvul.005G054300nos genes IAC Milênio e IPR Colibri em resposta a X. axonopodispv. phaseoli. No assunto3, verificou-se que entre os 555 genes, 491 eram expressos em nódulos e 486 nas raízes 19. Além disso, 50 elementos reguladores de ação cis(ERACs) estavam presentes na região promotora desses genes e os mais frequentes foramTATAbox, CAATbox, MYB, MYC e AT-TATAbox. Também foram identificados ERACs, GT1motif, W-box e WRE3, relacionados ao estresse biótico. Portanto, os resultados fornecem dados importantes sobre a função dos genes de defesa do feijão em resposta ao crescimento bacteriano comum, representando um amplo recurso para o aprimoramento genético dessa cultura.
Abstract: The common bean (PhaseolusvulgarisL.) is one of the most produced and consumed legumes in the world. However, numerous diseases affect the cultivation of this crop, among them, the common bacterial blight caused by the bacterium Xanthomonas axonopodispv. phaseoli. Under stress conditions, the plants activate signaling cascades that increase or suppress the expression of target geneschanging the physiological responses of plants. This work aimedto analyze the common bean molecular responses tocommon bacterial blight. The experiment was carried ina randomized block design with 2 cultivars (IPR Colibri-Susceptible andIAC Milênio-Moderately Resistant) x 7 methods (seeds inoculated by immersion, seeds inoculated by vacuum infiltration, inoculated leaves, leaves only wounds, inoculated stem, only injured stem anduninoculated plants (control)) with 4replicates. Plant leaves were collectedfor DNA methylation analysis and defense gene expression by semiquantitative PCR.Disease severity was assessed at 7, 14, 21 and 28 days after sowing. At 28 days aftersowing, plants were collected for analysis of fresh and dry matter mass of leaves andstems.Another study in silicoof the regulation of the promoters of genes that acts in the signaling toattack of pathogenswas realized.The results found in subject 1 indicate that the vacuum infiltration method was the most efficient to evaluate disease severity in both bean cultivars. In addition, shoot biomass values were related to severity, ie, in plants with higher severity, shoot mass was lower. In subject 2, we were observed that the cultivar IAC Milênio had greater increase in gene expression compared to cultivar IPR Colibri, for the analyzed genes, mainly for the Phvul.002G092300gene. In addition, the promoter methylation may influencethe expression of Phvul.002G092300, Phvul.003G159700, Phvul.004G015000and Phvul.005G054300genes in the IAC Milênio and IPR Colibri in response toX. axonopodispv. phaseoli. In subject 3, we were found that among the 555 genes, 491 were expressed innodules and 486 in roots 19. In addition, 50 cis-actingregulatory elements (ERACs) were present in the promoter region of these genes and the most frequent were TATA-box,CAAT-box, MYB, MYC and AT-TATA-box. ERACs, GT1-motif, W-box and WRE3, related to biotic stress were also identified. Therefore, the results provide important data on the function of bean defencegenes in responses to common bacterial growth, representing a broad resource for the genetic improvement of this crop.
URI: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/4500
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