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http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/33309| Título: | Produção de anticorpos policlonais a partir da gema do ovo de galinhas |
| Título(s) alternativo(s): | Production of polyclonal antibodies from chicken egg yolk |
| Autor(es): | Zulkowski, Yuri Kauan |
| Orientador(es): | Barros, Flavia Regina Oliveira de |
| Palavras-chave: | Imunoglobulinas Testes imunológicos Ovos Immunoglobulins Immunodiagnosis Eggs |
| Data do documento: | 6-Jul-2023 |
| Editor: | Universidade Tecnológica Federal do Paraná |
| Câmpus: | Dois Vizinhos |
| Citação: | ZULKOWSKI, Yuri Kauan. Produção de anticorpos policlonais a partir da gema do ovo de galinhas. 2023. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia) – Universidade Federal do Paraná, Dois Vizinhos, 2023. |
| Resumo: | Anticorpos policlonais são importantes ferramentas utilizadas para pesquisa básica e aplicada, medicina diagnóstica e clínica, devido a sua capacidade de identificar um alvo molecular específico. A maior parte dos produtos disponíveis são produzidos por mamíferos através de processos que causam grande estresse pois exigem a frequente coleta de grandes quantidades de sangue, muitas vezes necessitando a eutanásia do animal dependendo da espécie. Uma alternativa são os anticorpos policlonais produzidos por aves, imunoglobulinas Y (IgY), os quais são naturalmente transmitidos para os ovos e apresentam elevada taxa de produção. Assim, o objetivo deste trabalho foi a produção e purificação de IgY anti-IgG de coelho a partir da gema dos ovos de galinhas matrizes (Gallus gallus domesticus) para posterior aplicação em ensaios imunológicos. Os animais foram alojados na Unidade de Ensino, Pesquisa e Extensão em Avicultura da Fazenda Experimental da UTFPR-DV, e alimentados com ração comercial própria e água ad libitum. Foram utilizadas 2 galinhas matrizes da raça Ross 308 (n=2) que receberam três inoculações na musculatura peitoral de 1 mL de emulsão de adjuvante de Freund e tampão fosfato-salino (na proporção 1:1), contendo 200 µg do antígeno imunoglobulina G (IgG) de coelho (Oryctolagus cuniculus), com intervalos de 15 dias entre inoculações. Os ovos foram coletados diariamente ao final das sensibilizações. As IgY presentes na gema foram extraídas e purificadas utilizando metodologia modificada de Akita & Nakai (1993) e Wooley & Landon (1995). A validação da técnica foi realizada por imunodifusão radial e as proteínas foram analisadas pelo kit Bio-Rad DC™ Protein Assay e eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Obteve-se ao final do processo uma solução com concentração média de proteínas de 17,75 mg/mL após a última sensibilização das aves, onde a pureza dessas amostras foi comprovada pela corrida de eletroforese. Portanto, os anticorpos produzidos se encontram prontos para etapa de purificação por afinidade e para posterior conjugação com enzima peroxidase. |
| Abstract: | Polyclonal antibodies are essential tools for basic and applied research, diagnostic and clinical medicine due to their ability to identify a specific molecular target. Mammals produce most polyclonal antibodies through processes that cause significant stress, as they require the frequent collection of large amounts of blood, often requiring the euthanasia of the animal depending on the species. An alternative is the polyclonal antibodies produced by birds, immunoglobulin Y (IgY), which are naturally transmitted to eggs and have a high production rate. This work aimed to produce and purify IgY anti-rabbit IgG from egg yolks of breeder hens (Gallus gallus domesticus) for later application in immunological assays. The chickens will be housed in the Teaching, Research, and Outreach Unit in Poultry at the Experimental Farm of UTFPR-DV and fed with commercial feed and water ad libitum. Two Ross 308 breeder hens will be used (n=2). Three inoculations of 1 mL of Freund's adjuvant emulsion and phosphatesaline buffer (in a 1:1 ratio) containing 200 µg of rabbit (Oryctolagus cuniculus) immunoglobulin G antigen (IgG) will be performed in the pectoral muscles, with intervals of 15 days between inoculations. The eggs were collected daily at the end of the sensitizations. The IgY present in the yolk will be extracted and purified using a modified methodology from Akita & Nakai (1993) and Wooley & Landon (1995). The validation of the technique was performed by radial immunodiffusion and the proteins will be analyzed by the Bio-Rad DC™ Protein Assay kit and polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate (SDSPAGE). At the end of the process, a solution with an average protein concentration of 17.75 mg/mL was obtained after the last sensitization of the birds, and the purity of these samples was confirmed by the electrophoresis run. Therefore, the produced antibodies are ready for the affinity purification step and subsequent conjugation with peroxidase enzyme. |
| URI: | http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/33309 |
| Aparece nas coleções: | DV - Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia |
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