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http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/24440| Título: | Validação da metodologia para a determinação da atividade da fitase por espectrofotometria UV-Vis |
| Título(s) alternativo(s): | Validation of the methodology for the determination of phytase activity by UV-Vis spectrophometry |
| Autor(es): | Couto, Elaine Lilian Krause |
| Orientador(es): | Martin, Clayton Antunes |
| Palavras-chave: | Alimentos - Biotecnologia Química analítica Enzimas Food - Biotechnology Chemistry, Analytic Enzymes |
| Data do documento: | 21-Nov-2018 |
| Editor: | Universidade Tecnológica Federal do Paraná |
| Câmpus: | Toledo |
| Citação: | COUTO, Elaine Lilian Krause. Validação da metodologia para a determinação da atividade da fitase por espectrofotometria UV-Vis. 2018. Trabalho de Conclusão de Curso (Tecnologia em Processos Químicos) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Toledo, 2018. |
| Resumo: | Enzimas fitase possuem a propriedade de romper a ligação do fósforo orgânico ligado aos sais do ácido fítico, tornando-o disponível biologicamente. Nos vegetais, cerca de dois terços do fósforo encontram-se ligados aos fitatos. O fosfato inorgânico liberado é determinado por formar um complexo amarelo com a reação acídica molibdato/vanadato. O complexo é mensurado com o comprimento de onda de 415 nm e o fosfato inorgânico é quantificado pela curva padrão do fosfato. O método aplicado mede a atividade das fitases (FTU) pela quantidade de micromoles de fósforo inorgânico liberado do fitato de sódio, em um minuto, a uma temperatura de 37ºC e em pH 5,5. (1 FTU= 1μmol P inorgânico). Validação é a realização de um estudo, comprovado que garante seja qual for o método, processo, equipamento, material, atividade ou sistema confiável e evidente, seja favorável aos resultados pretendidos. Este estudo envolveu a verificação de figuras de mérito (linearidade, sensibilidade, limites de detecção (LD) e quantificação (LQ), precisão, exatidão e robustez) do método utilizado para determinar a atividade da fitase. Avaliou-se o padrão de fitase Sigma®, matéria-prima de fitase e rações com inclusão de fitase. A curva de calibração foi construída com padrão dihidrogenofosfato de potássio (0,10- 2,50 μmol/mL), em que a equação linear média obtida foi y = 0,3694x - 0,0138. A atividade de fitase mostrou-se instável para variações de pH, tempo e temperatura de reação, mantendo-se estável quando variou o volume de substrato. O método aplicado neste estudo apresentou linearidade, precisão, sensibilidade analítica e limites de detecção e quantificação adequados, em uma ampla faixa de concentração, tendo resultados próximos aos descritos no método. |
| Abstract: | Phytase enzymes have the property of breaking the binding of the organic phosphorus bound to the phytic acid salts, making it available biologically. In plants, about two-thirds of phosphorus is bound to phytates. The released inorganic phosphate is determined by forming a yellow complex with the acidic molybdate / vanadate reaction. The complex is measured at the wavelength of 415 nm and the inorganic phosphate is quantified by the standard phosphate curve. The applied method measures the phytase activity (FTU) by the amount of micromoles of inorganic phosphorus released from sodium phytate in one minute at a temperature of 37 ° C and at pH 5.5. (1 FTU = 1μmol inorganic P). Validation is the performance of a study, proven that guarantees whatever method, process, equipment, material, activity or system is reliable and evident, is favorable to the intended results. In this study was determined figures of merit(linearity, sensitivity, limits of detection (LD) and quantification LQ), precision, accuracy and robustness) of the method used to determine the fitase activity. In the study the phytase Sigma® standard, phytase raw material and phytase inclusion rations were evaluated. The calibration curve was constructed with standard potassium dihydrogenphosphate (0.10-2.50 μmol / mL), where the mean linear equation obtained was y = 0.3694x - 0.0138. Phytase activity was unstable for variations in pH, time and reaction temperature, and remained stable when the volume of substrate varied. The method applied in this study presented linearity, precision, analytical sensitivity and adequate detection and quantification limits, over a wide concentration range, with results close to those described in the method. |
| URI: | http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/24440 |
| Aparece nas coleções: | TD - Tecnologia em Processos Químicos |
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