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http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/11163| Título: | Estabelecimento de protocolo para extração de DNA de Apis mellifera visando a utilização de marcadores moleculares do tipo microssatélite |
| Título(s) alternativo(s): | Establishment of DNA extraction protocol of Apis mellifera for the use of microsatellites |
| Autor(es): | Priester, Andre Luis |
| Orientador(es): | Perseguini, Juliana Morini Küpper Cardoso |
| Palavras-chave: | Abelhas africanizadas Abelhas - Criação DNA Africanized honeybee Bee culture |
| Data do documento: | 26-Nov-2018 |
| Editor: | Universidade Tecnológica Federal do Paraná |
| Câmpus: | Dois Vizinhos |
| Citação: | PRIESTER, Andre Luis. Estabelecimento de protocolo para extração de DNA de Apis mellifera visando a utilização de marcadores moleculares do tipo microssatélite. 2018. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Zootecnia) - Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Dois Vizinhos, 2018. |
| Resumo: | As abelhas africanizadas são as maiores responsáveis pelo desenvolvimento da atividade apícola brasileira. Conhecer a variabilidade genética, através da análise do DNA, de colônias que são utilizadas em programa de melhoramento genético, é de extrema importância para obter ganhos genéticos. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi o de padronizar um protocolo de extração de DNA de abelhas africanizadas Apis mellifera provenientes de programa de melhoramento genético conduzido na Universidade Tecnológica Federal do Paraná - Câmpus Dois Vizinhos. Foram utilizadas rainhas e operárias, sendo realizado protocolos com a ponta das asas das rainhas e com todo o corpo das operárias para a extração de DNA. As extrações foram feitas utilizando um kit comercial ‘’Wizard genomic DNA Purification kit’’, e foram testados 5 protocolos diferentes (1, 2, 3, 4 e 5), sendo que para os quatro primeiros protocolos foram utilizadas asas de abelha para realizar a extração de DNA, e no último protocolo foi utilizado a abelha inteira para realizar a extração do DNA genômico total. Os marcadores SSRs utilizados nesse trabalho para padronização através da PCR (Polymerase Chain Reaction) foram: mrjp3, mrjp5, Ap243, Ap049 e Ap288 que foram amplificados pelo programa de amplificação Touchdown e submetidos a eletroforese para verificar a qualidade da amplificação. Dos protocolos analisados, apenas o nº 5 gerou material de qualidade para amplificação via PCR, sendo que para os demais protocolos não foi possível obter uma quantidade de DNA genômico total para realizar as reações de PCR, que são essenciais para realizar a genotipagem de locos SSRs, que serão empregados em um estudo futuro de diversidade genética. |
| Abstract: | Africanized bees are the main responsible for the development of Brazilian beekeeping activity. Knowing the genetic variability, through DNA analysis, of colonies that are used in a genetic breeding program, is extremely important to obtain genetic gains. In this sense, the aim of this study was to standardize a DNA extraction protocol of Africanized bees Apis mellifera from a breeding program conducted at Universidade Tecnológica Federal do Paraná Campus Dois Vizinhos. Queen and workers were used and protocols were carried out with the queens wing tip and the whole body of the workers for the DNA extraction. The extraction will be done using a commercial kit ‘’Wizard genomic DNA Purification kit’’, and were tested five different protocols (1, 2, 3, 4 e 5), being that for the first four protocols were used bee wings to perform the DNA extraction and in the last protocol the entire bee was used to perform the total genomic DNA extraction. The SSR markers used in this study for standardization through Polymerase Chain Reaction (PCR) were: mrjp3, mrjp5, Ap242, Ap049 and Ap288 that were amplified by touchdown amplification program and exposed to electrophoresis to verify the amplification quality. After the protocols analyze, only No. 5 generated quality material for amplification, and it was not possible to obtain an amount of total genomic DNA of the other protocols to perform the PCR reactions wich are essential to perform the genotyping of SSRs locus, wich will be used in a future study of genetic diversity. |
| URI: | http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/11163 |
| Aparece nas coleções: | DV - Zootecnia |
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